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第一章 基因与基因工程
1.掌握基因工程的概念,了解基因工程的发展历史以及研究意义;
2.掌握反向遗传学和表观遗传学的基本概念;了解人类基因组的测序原理及其意义。
第二章 基因工程的工具酶
1.限制性内切酶的命名和分类,重点掌握II型酶的特点和酶切图谱;
2. DNA连接酶的特点和应用;
3. DNA聚合酶的特点,掌握切口平移反应、逆转录酶、Taq聚合酶的实际运用;
4.掌握碱性磷酸酶、多核苷酸激酶、DNaseI等在基因克隆中的使用。
第三章 基因工程的载体系统
1.掌握质粒载体的基本特点和构建过程,质粒DNA的分离和检测;
2.掌握l噬菌体,粘粒(cosmid)、噬菌粒、M13载体的特点;
3.掌握YAC和BAC载体的结构特点,了解人工染色体的发展;
4.了解实验室常用的基因工程受体菌株,特别是大肠杆菌的特性。
第四章 基因文库的构建
1.掌握基因组文库和cDNA文库的概念、构建过程、应用;
2.比较基因组文库和cDNA文库的异同。
第五章 重组克隆的筛选与检测
1.掌握重组克隆的筛选方法,包括抗生素抗性、蓝白斑筛选、限制酶图谱法、PCR、分子杂交法、免疫化学检测法;
2.掌握各种实验技术的原理,包括琼脂糖凝胶电泳、分子杂交、PCR、序列分析等;
3.了解各种实验技术的发展和应用,如不同类型的PCR衍生技术。
第六章 目的基因的分离和克隆
1.掌握图位克隆技术、RACE、扣除杂交、DDRT-PCR、酵母双杂交技术、基因芯片技术的原理;
2.了解上述技术的应用。
第七章 外源基因在大肠杆菌细胞中的表达
1.掌握真核基因在原核细胞中进行表达需要的基本条件;
2.掌握原核表达载体的结构特点;
3.了解基因表达产物的分离和检测方法,主要是融合蛋白质的概念和特点;
第八章 分子标记技术
1.掌握常用分子标记的特点,如RAPD、AFLP、SSR、SNP、EST等;
2.了解分子标记的应用。
第九章 基因工程在动植物中的应用
1.了解动植物基因工程的原理和过程,掌握病毒载体、胚胎干细胞介导的基因导入、基因打靶技术、RNAi技术等;掌握Ti质粒载体及其介导的转化过程;
2.掌握外源基因表达的检测原理,各种选择标记基因、报告基因等;
3.了解动植物目的基因的克隆策略和方法,现状及其存在的问题。
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